液相色譜柱放了很長時間即使密封良好,柱內(nèi)的流動相還是會揮發(fā)掉一些。這時如果流動相流速上升得很快,就極易將色譜柱的柱床破壞,那怎么辦呢?
合理的操作是,一開始流動相用較小的流速0.1~0.2mL/mn(對4.6mm內(nèi)徑的標準分析柱),仔細觀察色譜柱出口(先不接管路)流動相流出的情況以及柱壓的變化。如果色譜柱沒全部干,很快會有帶氣泡的流動相流出,等流出流動相中沒有氣泡,壓力上升后,可逐步提高流速,使流動相充分浸潤柱床。
如果柱子里流動相基本干了一年以上,如果溶劑揮發(fā)性強,密封不好,時間可能更短),最好用更低的流速,讓流動相緩慢通過色譜柱,并將氣泡排除,這至少需幾個小時,有條件的沖洗幾天,也可放置幾天使流動相充分浸潤色譜柱的柱,切不可操之過急。
作為HPLC分析人員,當色譜柱拆下不用時,一定要把堵頭擰緊,使色譜柱兩頭密封。還應(yīng)當注意定期檢査長期不用的色譜柱,避免讓柱床干了。